在《熒光顯微鏡如何激發(fā)熒光的？》一文中我們?cè)?jīng)介紹了熒光顯微鏡的熒光激發(fā)原理，今天小編說說熒光顯微鏡激發(fā)光波長。

熒光顯微鏡是利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源，經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍(lán)光4200入)作為激發(fā)光、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察。

這樣在強(qiáng)烈的對(duì)襯背景下，即使熒光很微弱也易辨認(rèn)，敏感性高，主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究。熒光顯微鏡的基本構(gòu)造是由普通光學(xué)顯微鏡加上一些附件(如熒光光源、激發(fā)濾片、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎(chǔ)上組成的。

熒光光源——般采用超高壓汞燈(50一200W)，它可發(fā)出各種波長的光，但每種熒光物質(zhì)都有一個(gè)產(chǎn)生最強(qiáng)熒光的激發(fā)光波長，所以需加用激發(fā)濾片（一般有紫外、紫色、藍(lán)色和綠色激發(fā)濾片），僅使一定波長的激發(fā)光透過照射到標(biāo)本上，而將其他光都吸收掉。每種物質(zhì)被激發(fā)光照射后，在極短時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射波長更長的可見熒光。熒光具有專一性，一般都比激發(fā)光弱，為能觀察到專一的熒光，在物鏡后面需加阻斷(或壓制)濾光片。它的作用有二：一是吸收和阻擋激發(fā)光進(jìn)入目鏡、以免于擾熒光和損傷眼睛，二是選擇并讓特異的熒光透過，表現(xiàn)出專一的熒光色彩。兩種濾光片必須選擇配合使用。

常見問題：

1.熒光顯微鏡的汞燈發(fā)出的是廣譜激發(fā)波長，是不是已經(jīng)涵蓋了所有波長不需要再調(diào)了？

沒有覆蓋所有波長、有全光譜光源，通常使用的是100W 50W的汞燈為光源。

2.熒光高壓汞燈使用壽命大概多久？

超高壓汞燈(HBO)發(fā)光時(shí),泡內(nèi)產(chǎn)生50～70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓,它的引燃電壓很高,工作時(shí)維持電壓較低,約為50V～60V,電絲電流在4A左右,燈的壽命與啟動(dòng)次數(shù)和工作時(shí)間有關(guān)。啟動(dòng)次數(shù)愈多,每次工作時(shí)間愈短,壽命愈短。德國萊茨公司規(guī)定每啟動(dòng)一次工作3h,共啟動(dòng)70次為準(zhǔn),平均壽命為200h；日本奧林巴斯公司平均壽命是400h。使用中,當(dāng)燈泡變黑或達(dá)規(guī)定時(shí)間應(yīng)調(diào)換燈泡 ,否則除了燈的光度下降外,而且還有可能出現(xiàn)爆炸事故。熄滅時(shí)一般約15分鐘方完全冷卻,在未完全冷卻時(shí),切勿打開燈室,因熱燈泡內(nèi)壓力很大,聚冷會(huì)引發(fā)爆炸。因此需要嚴(yán)謹(jǐn)使用，部分實(shí)驗(yàn)室會(huì)要求統(tǒng)計(jì)使用時(shí)間 ，填寫記錄以保證安全。