相差與DIC(微分干涉相襯)是什么意思?
DIC 與相差成像技術(shù)的最根本區(qū)別體現(xiàn)在它的光學(xué)基礎(chǔ)上。通過比較可知,這兩種“對比增強型”成像效果區(qū)別明顯,但同時又有很多相似之處。
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在相差成像中,圖片的密度區(qū)別源于光通過樣品時的路程長短不一。灰背景正相差下,那些較厚的區(qū)域(光程長)在視野中呈現(xiàn)較周圍暗的效果;相對的,較薄的樣品或折射率低于周圍介質(zhì)的樣品在視野下則要亮些。
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在DIC 成像技術(shù)中,情況又有些不同。DIC 成像時,決定對比度的首要因素是光通路中的梯度變化(即光波傳播方向上的變化率)。梯度大的區(qū)域在視野下對比度高,并呈現(xiàn)出“偽立體”效果——這是DIC 的特征效果;而梯度較小的區(qū)域,如扁平的上皮細胞,則不會有很明顯的對比度呈現(xiàn),而且灰度值通常與背景相同。
除了這兩種成像技術(shù)機制上的差異,它們還有很多其他方面的不同。如Figure 1 所示,為DIC 及相差技術(shù)下三組相同的樣品利用數(shù)字相機獲得的圖片。圖中第一行采用的是DIC 成像技術(shù),下面一行采用了相差成像技術(shù)。我們可以看到,F(xiàn)igure 1(a) 圖中細胞及細胞核的周圍有一圈光暈存在,而Figure 1(b) 中則不存在這一現(xiàn)象。DIC 研究表明(方法未列出),在細胞的表面有細菌分布,而利用相差技術(shù)則檢測不到這一效果。
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在Figure 1(c) 中,我們可以看到DIC成像效果下,幾個細胞被一個小管圍繞,而相差技術(shù)(Figure 1(d))則無法展現(xiàn)這一細節(jié),如圖,成像模糊而且有光暈存在。然而,在相差圖片中,我們可以很清楚地觀察到細胞核結(jié)構(gòu),在DIC中,細胞核則無法識別。Figure 1(e), (f) 分別為藪枝媳環(huán)狀圍鞘的DIC 及相差成像圖。在DIC圖片中可以看到,環(huán)狀結(jié)構(gòu)呈半球形并且內(nèi)部有放射環(huán)結(jié)構(gòu),另外,主體結(jié)構(gòu)中有肉眼可見的顆粒狀結(jié)構(gòu),但是DIC 技術(shù)下無法看清樣品的內(nèi)部細節(jié);在相差圖片中,由于環(huán)狀結(jié)構(gòu)周圍及主體內(nèi)部光暈的存在,使這個樣品模糊不清。
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相較相差,DIC 的主要優(yōu)勢為不必考慮相差環(huán)及聚光鏡環(huán)的遮擋,可以實現(xiàn)高數(shù)值孔徑的物鏡觀察。這意味著DIC 可以提高軸向分辨率,這在分辨率要求很高的試驗中尤其有意義。
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相差顯微鏡:http://www.nrrfnfr.cn/products/microscope/2135-0-0-0-0
VMB300DIC微分干涉生物顯微鏡:http://www.nrrfnfr.cn/products/microscope/bio/vmb300dic/
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