相差顯微鏡的使用流程
從物鏡轉(zhuǎn)換器上拆下普通物鏡,旋入相差物鏡,與普通目鏡配套使用。
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2、轉(zhuǎn)盤聚光器的調(diào)換安裝
旋轉(zhuǎn)聚光器升降螺旋,把普通明視場聚光器至最低位,旋松固緊螺絲,卸下聚光器。把轉(zhuǎn)盤聚光器安放到相應(yīng)位置上,旋緊固緊螺絲,轉(zhuǎn)動聚光器升降螺旋,使聚光器升至最高位置。轉(zhuǎn)盤聚光器的標(biāo)示孔,朝向操作者。此時,轉(zhuǎn)盤聚光器上面的聚光鏡部分,進入光路;下面的環(huán)狀光闌轉(zhuǎn)盤,可視需要轉(zhuǎn)動使用,把與物鏡匹配的環(huán)孔旋入光路,使之處于轉(zhuǎn)盤聚光鏡下。
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3、把綠色濾色鏡放入鏡座的濾色鏡架上
轉(zhuǎn)盤聚光器調(diào)換安裝后,要進行合軸調(diào)中,使聚光器的光軸與顯微鏡的主光軸合一。其步聚如下:
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(1)把轉(zhuǎn)盤聚光器的環(huán)狀光闌調(diào)至“0”位,明視場照明的普通可變光闌進入光路。
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(2)旋轉(zhuǎn)聚光器升降螺旋,聚光器升至最高位。
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(3)接通照明光源,使視場明亮。
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(5)縮小鏡座上的視場光闌開孔,至最小。
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(6)從目鏡觀察,在暗視場中可見一縮小的、明亮的、多角形的視場光闌圖像。
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(7)轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)盤聚光器的兩個調(diào)中桿,推動聚光器,把視場中的明亮的多角形的視場光闌圖像,調(diào)至視場中央。
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(8)開放視場光闌至視場同大,視兩者周邊是否完全重合;否則,復(fù)用調(diào)中螺桿,使聚光器精神調(diào)中。
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4、相板圓環(huán)與環(huán)狀光闌圓環(huán)的合軸調(diào)中
相差物鏡的后焦面裝有相板。按物鏡放大率與反差效果的不同,相板圓環(huán)(共軛面)的大小與結(jié)構(gòu)亦不同。轉(zhuǎn)盤聚光器的環(huán)狀光闌為一系列的透光的,不同大小的明亮環(huán)孔,與不同放大率的物鏡相應(yīng)。使用時嚴(yán)格匹配,當(dāng)物鏡更換時,環(huán)狀光闌亦作相應(yīng)的更換或調(diào)整。
在視場中觀察所見,環(huán)狀光闌為一明亮的圓環(huán),而相板的圓環(huán)為一暗環(huán)?;ハ嗥ヅ涞拿鳝h(huán)與暗環(huán)大小一致。在使用時兩者要合軸,互相重疊。兩環(huán)的重疊,須通過合軸調(diào)節(jié)方能取得。其方法如下:
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(1)相差物鏡與環(huán)狀光闌的匹配:正確地匹配取決于所用物鏡放大率。例如,當(dāng)使用40×相差物鏡時,環(huán)狀光闌轉(zhuǎn)向ph3或40位,使相應(yīng)地環(huán)狀光闌進入光路。
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(2)把CT放入目鏡筒:從目鏡筒取出一個目鏡,換入調(diào)中合軸望遠鏡(CT)。CT為一眼透鏡,也是可行升降調(diào)節(jié)的望遠目鏡,專為觀察視場中明環(huán)與暗環(huán)圖像之用。因為用一般目鏡看不見兩環(huán)的清晰圖像。CT在使用前眼透鏡應(yīng)處于最低位,即CT為最短小的狀態(tài)。
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(3)明環(huán)與暗環(huán)的聚焦:一手固定位于目鏡筒中的CT鏡筒,使其透鏡位置不能上移,另一手逆時針轉(zhuǎn)到CT上部可調(diào)的眼透鏡部分。轉(zhuǎn)動的同時,通過CT向現(xiàn)場中觀察,即國旋轉(zhuǎn)邊觀察初始,兩環(huán)可能為模糊的圖像,繼續(xù)轉(zhuǎn)動CT目鏡可調(diào)部分至清晰地窺見明環(huán)與暗環(huán)止。
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(4)明環(huán)與暗環(huán)的調(diào)中重疊:相板的暗環(huán)是固定不動的,處于光路之中,暗環(huán)的中心,即顯微鏡光軸的中心。環(huán)狀光闌的亮環(huán)可調(diào)節(jié)移動。轉(zhuǎn)盤聚光器環(huán)狀光闌的位置,因聚光器的可調(diào)其中心位置,往往偏離光軸軸心,需調(diào)整,使其歸中。環(huán)狀光闌的調(diào)中裝置或部件,因廠家或型號的不同而有別。如OLYMPUS BH2-PC型相差顯微鏡,環(huán)狀光闌調(diào)中裝置為位于轉(zhuǎn)盤聚光器兩側(cè)的兩個伸絲自如的調(diào)中螺桿,用以操縱改換環(huán)狀光闌的方位,達到調(diào)中;而Nikon FIVORPHOT型顯微鏡的相差裝置,其環(huán)狀光闌的調(diào)中部件為位于轉(zhuǎn)盤聚光器表面,可向任一方向滑動的環(huán)狀鈕。調(diào)中時,手指調(diào)中裝置,移動明環(huán),使之與暗環(huán)合一。在兩環(huán)調(diào)中過程,始終在通過CT的觀察下進行。
在調(diào)節(jié)過程中,如亮環(huán)比暗環(huán)小,并位于暗環(huán)內(nèi)側(cè)時,應(yīng)降低聚光器位置,使亮環(huán)放大。若亮環(huán)大于暗環(huán)時,應(yīng)提升聚光器,使亮環(huán)縮小。如聚光器已升至最頂點還不能完全重合,可能是載玻片過厚之故。
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(5)回裝觀察目鏡:待相差物鏡的暗環(huán)與環(huán)狀光闌的亮環(huán)調(diào)中、重疊后,從目鏡筒中取出CT,放回觀察用的接目鏡,以便鏡檢觀察。
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相差物鏡有不同倍率、不同反差類別和反差程度之分。相差物鏡的反差類別和反差程度以及放大倍數(shù),皆用英文字母和數(shù)字標(biāo)示在物鏡殼中。例如:
20×PH=20倍,正反差,反差程度高。
20×PM=40倍,正反差,反差程度中等。
100×PL=100倍,正反差,反差程度低。
40×NH=40倍,負(fù)反差,反差程度高。
40×NM=40倍,負(fù)反差,反差程度中等。
100×NL=100倍,負(fù)反差,反差程度低。
100×DH=100倍,暗反差,反差程度高。
40×DM=40倍,暗反差,反差程度中等。
20×DL=20倍,暗反差,反差程度低。
10×BH=10倍,明反差,反差程度高。
20×BM=20倍,明反差,反差程度中等。
40×BL=40倍,明反差,反差程度低。
相差鏡檢時,依被檢樣品的種類、結(jié)構(gòu)和反差程度的不同,而確定應(yīng)選用相差物鏡的種類。這不存在死硬的規(guī)定,可依觀察者的習(xí)慣和愛好而變。一般來說,相差物鏡的應(yīng)用范圍如表1-1。
就某一具體被檢物體來說,適于明反差或適于暗反差,難以定論。通常是哪一種相差物鏡都能得到清晰的像,只是有的物鏡更好些而已,因此可任意選擇。有的樣品只適于某一種相差物鏡。暗反差物鏡對習(xí)慣于明視場境檢者很適宜。當(dāng)與染色標(biāo)本進行比較或進行測定以及加強半透明物體的反差時,多用暗反差;而計算數(shù)量或觀察物體運動以及研究極小的樣品時,多使用明反差。
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?表1-1? 相差物鏡應(yīng)用范圍
?字母 |
? 反差 |
? ? ? ? ? ? ? ?應(yīng)用 |
? P |
? ?正 |
|
? N |
? ?負(fù) |
觀察微小的物體如孢子、鞭毛和活的樣品等 |
? H |
? ?高 |
當(dāng)樣品反差較低時 |
? L |
? ?低 |
當(dāng)樣品反差較高時 |
? M |
? ?中 |
當(dāng)樣品反差為中等時 |
總之,在相差鏡檢時,于諸多的相差物鏡中選一物鏡,絕非易事。除參考上表所列應(yīng)用范圍外,最佳方法是通過各種類型的相差物鏡進行實際鏡檢測定,找出最宜相差物鏡。
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